1. Tujuan: Prosedur ini bertujuan untuk menyediakan prosedur standar untuk operasi aseptik dan perlindungan ruang steril.
2. Lingkup aplikasi: laboratorium pengujian biologi
3. Penanggung Jawab: Supervisor QC/Penguji
4. Definisi: Tidak ada
5. Tindakan pencegahan keselamatan
Lakukan operasi secara aseptik untuk mencegah kontaminasi mikroba; operator harus mematikan lampu UV sebelum memasuki ruang steril.
6. Prosedur
6.1. Ruang steril harus dilengkapi dengan ruang operasi steril dan ruang penyangga. Kebersihan ruang operasi steril harus mencapai kelas 10000. Suhu ruangan harus dijaga pada 20-24°C dan kelembapan harus dijaga pada 45-60%. Kebersihan meja steril harus mencapai kelas 100.
6.2. Ruang steril harus dijaga kebersihannya, dan dilarang keras menumpuk sampah untuk mencegah kontaminasi.
6.3. Cegah kontaminasi secara ketat pada semua peralatan sterilisasi dan media kultur. Peralatan yang terkontaminasi harus dihentikan penggunaannya.
6.4. Ruang steril harus dilengkapi dengan disinfektan konsentrasi kerja, seperti larutan kresol 5%, alkohol 70%, larutan klorometionin 0,1%, dan lain sebagainya.
6.5. Ruang steril harus disterilkan dan dibersihkan secara teratur dengan disinfektan yang sesuai untuk memastikan kebersihan ruang steril memenuhi persyaratan.
6.6. Semua instrumen, alat, piring, dan barang-barang lain yang perlu dibawa ke ruang steril harus dibungkus rapat dan disterilkan dengan metode yang sesuai.
6.7. Sebelum memasuki ruang steril, staf harus mencuci tangan dengan sabun atau disinfektan, kemudian mengganti pakaian kerja khusus, sepatu, topi, masker, dan sarung tangan di ruang penyangga (atau menyeka tangan kembali dengan etanol 70%) sebelum memasuki ruang steril. Lakukan operasi di ruang bakteri.
6.8. Sebelum menggunakan ruang steril, lampu ultraviolet di ruang steril harus dinyalakan untuk penyinaran dan sterilisasi selama lebih dari 30 menit, dan meja steril harus dinyalakan untuk penghembusan udara secara bersamaan. Setelah operasi selesai, ruang steril harus dibersihkan tepat waktu dan kemudian disterilkan dengan sinar ultraviolet selama 20 menit.
6.9. Sebelum pemeriksaan, kemasan luar sampel uji harus tetap utuh dan tidak boleh dibuka untuk mencegah kontaminasi. Sebelum pemeriksaan, gunakan kapas yang dibasahi alkohol 70% untuk mendisinfeksi permukaan luar.
6.10. Selama setiap operasi, kontrol negatif harus dilakukan untuk memeriksa keandalan operasi aseptik.
6.11. Saat menyerap cairan bakteri, Anda harus menggunakan bola penghisap untuk menyerapnya. Jangan menyentuh sedotan langsung dengan mulut Anda.
6.12. Jarum inokulasi harus disterilkan dengan api sebelum dan sesudah setiap penggunaan. Setelah dingin, kultur dapat diinokulasi.
6.13. Sedotan, tabung reaksi, cawan petri, dan peralatan lain yang mengandung cairan bakteri harus direndam dalam ember sterilisasi berisi larutan Lysol 5% untuk disinfeksi, dan dikeluarkan serta dibilas setelah 24 jam.
6.14. Jika terdapat cairan bakteri yang tumpah di meja atau lantai, Anda harus segera menuangkan larutan asam karbolat 5% atau Lysol 3% pada area yang terkontaminasi selama minimal 30 menit sebelum membersihkannya. Jika pakaian kerja dan topi terkontaminasi cairan bakteri, harus segera dilepas dan dicuci setelah disterilisasi dengan uap bertekanan tinggi.
6.15. Semua barang yang mengandung bakteri hidup harus didesinfeksi sebelum dibilas di bawah keran. Mencemari saluran pembuangan dilarang keras.
6.16. Jumlah koloni di ruang steril harus diperiksa setiap bulan. Dengan meja steril terbuka, ambil sejumlah cawan petri steril dengan diameter dalam 90 mm, dan secara aseptik masukkan sekitar 15 ml media kultur agar nutrisi yang telah dilelehkan dan didinginkan hingga sekitar 45°C. Setelah mengeras, letakkan terbalik pada suhu 30 hingga 35°C. Inkubasi selama 48 jam dalam inkubator. Setelah terbukti steril, ambil 3 hingga 5 cawan dan letakkan di sebelah kiri, tengah, dan kanan posisi kerja. Setelah membuka penutup dan membiarkannya selama 30 menit, letakkan terbalik dalam inkubator pada suhu 30 hingga 35°C selama 48 jam dan keluarkan untuk diperiksa. Jumlah rata-rata bakteri lain-lain pada cawan di area bersih kelas 100 tidak boleh melebihi 1 koloni, dan jumlah rata-rata di ruang bersih kelas 10000 tidak boleh melebihi 3 koloni. Jika batas terlampaui, ruang steril harus didesinfeksi secara menyeluruh hingga inspeksi berulang memenuhi persyaratan.
7. Merujuk pada bab (Metode Inspeksi Sterilitas) dalam "Metode Inspeksi Higienis Obat" dan "Praktik Operasi Standar Tiongkok untuk Inspeksi Obat".
8. Departemen Distribusi: Departemen Manajemen Mutu
Panduan teknis ruang bersih:
Setelah mendapatkan lingkungan dan bahan yang steril, kita harus mempertahankan kondisi steril agar dapat mempelajari mikroorganisme tertentu yang telah diketahui atau memanfaatkan fungsinya. Jika tidak, berbagai mikroorganisme dari luar dapat dengan mudah bercampur. Fenomena pencampuran mikroorganisme yang tidak relevan dari luar disebut bakteri kontaminan dalam mikrobiologi. Pencegahan kontaminasi merupakan teknik penting dalam pekerjaan mikrobiologi. Sterilisasi lengkap di satu sisi dan pencegahan kontaminasi di sisi lain adalah dua aspek teknik aseptik. Selain itu, kita harus mencegah mikroorganisme yang sedang dipelajari, terutama mikroorganisme patogen atau mikroorganisme hasil rekayasa genetika yang tidak ada di alam, agar tidak keluar dari wadah percobaan kita ke lingkungan luar. Untuk tujuan ini, dalam mikrobiologi, terdapat banyak tindakan yang dapat dilakukan.
Ruang steril biasanya berupa ruangan kecil yang khusus dibuat di laboratorium mikrobiologi. Dapat dibangun dengan lembaran dan kaca. Luasnya tidak boleh terlalu besar, sekitar 4-5 meter persegi, dan tingginya sekitar 2,5 meter. Ruang penyangga (buffer room) harus dibuat di luar ruang steril. Pintu ruang penyangga dan pintu ruang steril tidak boleh menghadap ke arah yang sama untuk mencegah aliran udara membawa bakteri asing. Baik ruang steril maupun ruang penyangga harus kedap udara. Peralatan ventilasi dalam ruangan harus memiliki alat penyaring udara. Lantai dan dinding ruang steril harus halus, sulit menampung kotoran, dan mudah dibersihkan. Permukaan kerja harus rata. Baik ruang steril maupun ruang penyangga dilengkapi dengan lampu ultraviolet. Lampu ultraviolet di ruang steril berjarak 1 meter dari permukaan kerja. Staf yang memasuki ruang steril harus mengenakan pakaian dan topi steril.
Saat ini, ruang steril sebagian besar terdapat di pabrik mikrobiologi, sedangkan laboratorium umum menggunakan meja bersih (clean bench). Fungsi utama meja bersih adalah menggunakan perangkat aliran udara laminar untuk menghilangkan berbagai debu kecil termasuk mikroorganisme pada permukaan kerja. Perangkat listrik memungkinkan udara melewati filter HEPA dan kemudian masuk ke permukaan kerja, sehingga permukaan kerja selalu berada di bawah kendali aliran udara steril. Selain itu, terdapat tirai udara berkecepatan tinggi di sisi yang dekat dengan bagian luar untuk mencegah masuknya udara bakteri dari luar.
Di tempat-tempat dengan kondisi sulit, kotak steril kayu juga dapat digunakan sebagai pengganti meja steril. Kotak steril memiliki struktur sederhana dan mudah dipindahkan. Terdapat dua lubang di bagian depan kotak, yang ditutup dengan pintu dorong-tarik saat tidak digunakan. Anda dapat memasukkan lengan Anda saat operasi. Bagian atas depan dilengkapi dengan kaca untuk memudahkan operasi di dalam. Terdapat lampu ultraviolet di dalam kotak, dan peralatan serta bakteri dapat dimasukkan melalui pintu kecil di samping.
Teknik operasi aseptik saat ini tidak hanya memainkan peran penting dalam penelitian dan aplikasi mikrobiologi, tetapi juga banyak digunakan dalam berbagai bioteknologi. Misalnya, teknologi transgenik, teknologi antibodi monoklonal, dan lain sebagainya.
Waktu posting: 06-03-2024